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警惕!猪场又出现新疫病

来源:互联网 2016-08-01 09:41:37| 查看:

  2.1.2 分子诊断技术
 

  NiV 的基因组全序列已被测出,研究者们可以在此基础上针对NiV 的分子诊断技术进行相应的研发。目前,已经被报道的针对NiV 的分子检测技术有2 种,分别为荧光定量RT-PCR和双重套式RT-PCR。
 

  2.1.2.1 荧光定量RT-PCR
 

  该方法敏感度高、特异性强,并且不需要接触活的感染性病毒,具有生物安全性的优势。其检测灵敏度可以达到 1 个空斑形成单位( PFU),并且有被学术界普遍认可的相关引物和探针有:
 

  5′-TCAGCAGGAAGGCAAGAGAGTAA-3′(Primer1),
 

  5′-CCCCTTCATCGATATCTTGATCA-3′(Primer2),
 

  5′-6FAM-CCTCCAATGAGCACACCTCCTGCAGTAMRA-3 ′(TaqMan probe),为NiV 的实验室快速诊断提供了技术支持。
 

  2.1.2.2 双重套式RT-PCR :
 

  Wacharapluesadee 等描述了一种带有内参的双重套式RT-PCR 检测技术。该技术能够用于对果蝠尿样的检测,并且加入内参大大降低PCR 相关的抑制因素带来的假阴性的结果,提高检出准确率,在NiV 流行病学调查时大大提高NiV 监测数据的可靠性。
 

  2.1.3 其他诊断技术
 

  主要针对NiV 全病毒抗原或病毒主要致病抗原(如F 蛋白和G 蛋白等)制备特异性的病毒抗血清或单克隆抗体,在此基础上建立病毒中和试验、免疫组化以及免疫荧光等方法检测NiV相关抗原。病毒中和试验主要包括传统的空斑抑制试验、微孔板中和试验以及免疫空斑试验3种,分别通过计算空斑形成单位(PFU)、组织培养半数感染量(TCID50)以及病灶形成单位(FFU)达到检测病毒抗原或抗体的目的。检测NiV 的病毒中和试验需要在BSL4 级生物实验室进行,但近年来研究者们陆续开发了几种实验室检测技术,能够将检测NiV的生物安全水平降低至BSL2 级,为偏远地区NiV 检测提供了帮助。由于NiV 原发于血管内壁,所以病死畜的多个器官均可用于免疫组化的检测,尤其是肺脏。
 

  目前,研究者们已经针对NiV 的免疫组化法检测研发了几个检测体系,为该病毒的实验室检测提供了技术支持。


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